萊克多巴胺檢測試劑盒原理及樣本前處理

 1. 原理

萊克多巴胺檢測試劑盒采用間接競爭ELISA方法檢測尿樣、組織、飼料等樣本中的萊克多巴胺（Ractopamine，RAC），試劑盒由預包被偶聯抗原的酶標板、辣根酶標記物、抗體、標準品及其他配套試劑組成。檢測時，加入標準品或樣品溶液，樣本中的萊克多巴胺和酶標板上預包被偶聯抗原競爭抗萊克多巴胺抗體，加入酶標記物后，用TMB底物顯色，樣本吸光度值與其所含萊克多巴胺含量成負相關，與標準曲線比較即可得出樣本中萊克多巴胺的殘留量。

2.樣本前處理

2.1 樣本處理前須知：

實驗器具必須潔凈并使用一次性吸頭，以避免污染干擾實驗結果。

2.2 配液：

配液1：復溶液

    將10×復溶液用去離子水10倍稀釋，用于樣本的復溶，復溶液在4℃環境可保存一個月。

2.3 樣本前處理步驟：

2.3.1 尿樣處理方法：

    直接取20µl清亮尿樣進行測定（渾濁尿樣需要過濾或經4000r/min離心5min，以得到清亮尿樣），暫不使用的樣本應冷凍保存。

尿樣本稀釋倍數：1    檢測下限：0.1ppb

2.3.2 組織樣本處理方法一：

   稱取均質后的組織樣本2±0.05g ，加入6ml復溶液，充分振蕩2min，室溫4000r/min以上離心10min (若組織樣本中油脂含量較高，可在振蕩后放入85℃水浴10min后再離心)。取20µl上清液進行分析。

樣本稀釋倍數：4    檢測下限：0.4ppb

2.3.3 組織樣本（肌肉和肝臟）處理方法二：

1）稱取均質后的組織樣本2±0.05g ，加入8ml乙腈溶液，充分振蕩2min，室溫4000r/min以上離心10min。

2）取上清液5ml，在56℃條件下氮氣或空氣流吹至*干燥；

▲肌肉樣本：

    加入1ml 復溶液混合振蕩30s，取20µl用于分析。

肌肉樣本稀釋倍數：1    檢測下限：0.1ppb

▲肝臟樣本：

    加入2ml正己烷振蕩溶解，再加入1ml 去離子水混合振蕩30s，室溫4000r/min以上離心5min，去除上層；取50µl下層與50µl復溶液混勻；取20µl用于分析。

肝樣本稀釋倍數：2    檢測下限：0.2ppb

2.3.4 飼料樣本處理方法：

1）稱取均質后的飼料樣品1.0±0.05g，加入10ml甲醇，再加入5g無水*，振蕩2min；室溫 4000r/min以上離心10min；

2）吸出離心后的上清液1ml，于56℃氮氣吹干，用1 ml復溶